• 產(chǎn)品品牌： REAGEN
• 產(chǎn)品貨號(hào)： RN100FP
• 產(chǎn)品規(guī)格： 50/100T
• 產(chǎn)品適用： 本試劑盒適用于體外定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。
• 產(chǎn)地來(lái)源： 深圳
• 保質(zhì)期： 12個(gè)月

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：乙型肝炎病毒（HBV）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

【包裝規(guī)格】

50人份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于體外定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)乙型肝炎病毒（HBV）的特異性DNA核酸片段進(jìn)行熒光PCR定量檢測(cè)。

【主要成分】

【儲(chǔ)存條件及有效期】 

試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過(guò)5次。

【適用儀器】

熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。

【樣本要求】

1.適用樣本類型：人血清或血漿樣本

2.樣本保存與運(yùn)送：

上述采集的樣本可立即用于檢測(cè)，或2-8℃保存（不超過(guò)24小時(shí)），長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃。標(biāo)本運(yùn)送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

 【檢驗(yàn)方法】

1. 樣本處理

將待測(cè)樣本、陽(yáng)性定量參考品、陰性參考品、強(qiáng)陽(yáng)性參考品、臨界陽(yáng)性參考品進(jìn)行同步處理。取200ul樣本各加入內(nèi)參質(zhì)控品5ul,按照核酸提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸提取。

2. 試劑配置（在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行，與擴(kuò)增區(qū)分開(kāi)，冰上操作）

注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會(huì)出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。

若有N個(gè)待檢測(cè)樣本，按下表要求進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標(biāo)記，擴(kuò)增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

3. 加樣（在樣品處理區(qū)進(jìn)行，冰上操作）

按陰性質(zhì)控品、待測(cè)樣品、臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品和定量標(biāo)準(zhǔn)品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴(kuò)增反應(yīng)液的八聯(lián)管中，反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)（在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

選擇FAM通道檢測(cè)乙型肝炎病毒（HBV）核酸，選擇CY5通道檢測(cè)內(nèi)標(biāo)。按以下擴(kuò)增程序表設(shè)置PCR擴(kuò)增參數(shù)。點(diǎn)擊樣本參數(shù)界面，按樣本對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控（NTC）、陽(yáng)性質(zhì)控以及未知樣本(UNK),陽(yáng)性定量參考品在“樣本類型”中選擇“標(biāo)準(zhǔn)”，“標(biāo)準(zhǔn)濃度”中輸入濃度。

5.質(zhì)量控制

以上要求需在同一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足，否則，本次實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需重新進(jìn)行

6.結(jié)果判讀

反應(yīng)結(jié)束自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可以在3~15、End 值可設(shè)在5~20，調(diào)整陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊Analysis 自動(dòng)獲得分析結(jié)果，在Report 界面觀看結(jié)果，記錄未知樣本數(shù)值（C）。

試驗(yàn)結(jié)果判斷

6.1如果FAM通道無(wú)典型擴(kuò)增曲線或Ct值>40,CY5通道有典型擴(kuò)增曲線，Ct值<35,則判定陰性；

6.2如果FAM通道無(wú)典型擴(kuò)增曲線或Ct值>40,CY5通道無(wú)典型擴(kuò)增曲線或者Ct值>35,則需要重新采樣檢測(cè)。

6.3如果FAM通道有典型擴(kuò)增曲線或Ct值≤40，，則按以下方法判斷：

若樣本C<100,則該樣本的HBV DNA濃度<100IU/mL;

若樣本100<C<5.00E+008,則該樣本的HBV DNA濃度=C IU/mL;

若樣本C>5.00E+008,則該樣品的HBV DNA濃度>5x10⁸IU/mL。如果需要精確定量結(jié)果，可將樣品用陰性質(zhì)控品稀釋到線性范圍后再檢測(cè)。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1．實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，如陰性對(duì)照檢測(cè)為陽(yáng)性，則需做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來(lái)確認(rèn)是哪類污染。如為試劑污染，需開(kāi)封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；如為樣品交叉污染，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；如為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，需對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2．試劑運(yùn)輸、保存或配制不當(dāng)會(huì)引起試劑檢測(cè)性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)為陰性，應(yīng)開(kāi)封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

【檢測(cè)方法的局限性】

1. 該試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀或體征、病史、其它實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

2. 當(dāng)樣本的病毒含量低于最低檢出限時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說(shuō)明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測(cè)極限，但不能完全排除病毒感染的可能。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1.準(zhǔn)確性：企業(yè)陽(yáng)性參考品檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為15/15。

2.最低檢測(cè)限：該試劑盒最低檢測(cè)限為30IU/mL。

3.對(duì)不同基因型的覆蓋：本試劑盒對(duì)常見(jiàn)的HBV B、C、D型樣本，均可在最低檢出限濃度檢出為陽(yáng)性。

4.臨床特異性：對(duì)10份臨床HBV DNA陰性樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。

5.經(jīng)驗(yàn)證與下列病原體無(wú)交叉反應(yīng)：甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒、人乳頭瘤病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、水痘帶狀皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、EB病毒、人巨細(xì)胞病毒、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌。

【注意事項(xiàng)】

1．請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求在冰上操作。

2．試劑配制建議在試劑配制區(qū)進(jìn)行，樣品處理要求在生物安全柜內(nèi)操作。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

3．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。反復(fù)凍融可能降低試劑盒靈敏度，請(qǐng)按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

4．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，切忌開(kāi)蓋。

5．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用試劑盒。

6. 本品僅用于體外診斷。